Laporan Laboratorium Sampel: Fungsi glukosa
Apa fungsi glukosa, digunakan bersamaan dengan lysosome pada langkah awal praktis?
Dalam proses isolasi, tujuan glukosa adalah untuk mencegah sel pecah setelah terpapar buffer. Glukosa mencapai ini dengan meningkatkan osmolaritas di luar dinding sel di mana larutan buffer dekat dengan dinding sel (Mills 2002 p. 99). Ini untuk mencegah sel meledak sebelum waktunya yang akan mempengaruhi hasil dan menurunkan sampel yang diekstraksi. Glukosa sangat ideal untuk digunakan karena tidak mempengaruhi atau meniadakan fungsi buffer yang digunakan dalam isolasi. Fungsi lisosom adalah mencerna dinding sel ke titik yang terbuka. Ini juga digunakan untuk menghilangkan materi yang tidak diinginkan di dalam sel.
Jelaskan sepenuhnya peran NaOH dalam prosedur Lyses untuk mendapatkan molekul plasmid tertutup secara kovalen.
Sodium hydroxide digunakan untuk memisahkan DNA plasmid dari DNA apa pun yang dicukur atau kromosom. DNA gunting dan kromosom bersifat linier berbeda dengan plasmid, yang kebetulan melingkar. Sodium hydroxide adalah basis dan ditambahkan ke solusi untuk meningkatkan alkalinitasnya secara ideal untuk pH 12,5 sekitar. Ini bertindak dengan melonggarkan dinding sel, yang sangat kaku, dan tindakan ini melepaskan DNA di dalam sel. Sodium hydroxide digunakan dalam ekstraksi DNA plasmid. Plasmid adalah molekul DNA yang berbeda dan tidak tergantung pada DNA kromosom bahkan untuk mereplikasi secara mandiri (Mitra 2003 hal. 87). DNA plasmid dapat berupa lingkaran atau ganda terdampar dan dikodekan untuk gen tertentu. DNA kromosom di sisi lain mengontrol fungsi dan proses sel. Ketika solusi yang digunakan dalam ekstraksi adalah dasar, natrium hidroksida ditambahkan untuk menjadikannya dasar. Setelah penambahan, molekul yang terdampar ganda dipisahkan dalam proses yang disebut denaturasi.
Denaturation adalah situasi di mana protein mulai kehilangan struktur sekunder dan tertian mereka dalam keadaan adat mereka. Keadaan pribumi protein adalah bentuk asli protein saat dikumpulkan dengan benar dengan cara yang beroperasi dan praktis. Proses denaturasi pecah dan / atau mengganggu ikatan yang lemah, yang berarti bahwa negara adat ini terpengaruh dan berubah meninggalkan sel dengan hanya struktur utamanya (Bjornsti 1999 p. 68). Denaturation memisahkan untaian DNA tetapi proses ini tidak dapat diubah. Jika suatu solusi tidak lagi basa, untaian yang dipisahkan dapat menghubungkan kembali dan sekali lagi menjadi bundar dan bergaris ganda. Proses ini disebut Renaturation.
Karena efek super melingkar, DNA plasmid mengambil beberapa bentuk 3 dimensi yang memiliki mobilitas yang berbeda pada gel. Jelaskan dan jelaskan sepenuhnya hasil yang telah Anda peroleh dengan persiapan dan standar yang diketahui.
Helai tunggal yang diperoleh dari sampel A murni dengan kurangnya DNA super coiled yang berawan. Gel memisahkan potongan sesuai ukuran. Potongan besar bergerak lebih lambat melalui sel dibandingkan dengan potongan-potongan kecil, yang memindahkan yang paling jauh dan tercepat. DNA adalah komponen terkecil dan bergerak ke lokasi terjauh untuk menghasilkan sampel murni. Di B dan C, ada pita mulai dari 1,67 hingga 2,35Kbp. Akibatnya, ini menunjukkan bahwa ketegangan bakteri mengandung plasmid. Plasmid yang paling dikenal adalah elemen stabil dan ini karena mereka memiliki banyak replikasi selain kemampuan untuk mengkodekan metode pembunuhan pasca-segregasi (Copeland 2002 p. 134). Namun, dalam D, tidak ada untaian berawan seperti dalam sampel A. Ini mungkin disebabkan oleh proses pemurnian yang belum sempurna yang berarti bahwa tidak semua DNA kromosom dihilangkan. Jika satu pipet, potongan-potongan DNA kromosom menggeser dan mematahkan plasmid super melingkar yang menghasilkan lingkaran berleher atau konformasi linear, yang mengurangi konformasi super melingkar dengan jumlah yang kurang ideal.
Jelaskan secara singkat konsep amplifikasi plasmid di hadapan inhibitor sintesis protein host bakteri.
Amplifikasi plasmid adalah proses peningkatan hasil DNA. Replikasi plasmid bekerja lebih baik di hadapan inhibitor daripada ketika inhibitor tidak digunakan. Amplifikasi plasmid hanya kompatibel dalam plasmid yang tidak memiliki ketahanan terhadap inhibitor yang digunakan. Selanjutnya, regulasi ketat dan pemantauan proses diperlukan untuk mencapai hasil terbaik atau proses replikasi akan gagal. Reproduksi protein yang bersifat rekombinan biasanya mengganggu status fisiologis entitas inang dengan menghasut tanggapan yang membuat stres. Pendahuluan bersamaan dari protein rekombinan pada level yang berada di atas yang normal membentuk angka inklusi akibatnya melemahkan intensifikasi plasmid. Fenomena ini dapat diamati ketika teknik dan suhu ekspresi IPTG-produktif digunakan. Ini berarti bahwa rekombinan gen yang lebih tinggi muncul dalam hubungannya dengan adanya pembentukan tubuh mengganggu baik fungsi plasmid dan sel inang.
